原代小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)體系有哪些優(yōu)化方法

更新時間：2026-01-21

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原代小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)體系是一個為體外生長的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物的小梁網(wǎng)細(xì)胞設(shè)計的理想的完培方案。本體系是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO2的氣體環(huán)境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng)，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清（10%）。

原代小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)體系有哪些優(yōu)化方法：

無菌操作與污染防控：

‌嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作‌：所有操作在生物安全柜內(nèi)進行，使用前用70%乙醇擦拭臺面，定期紫外線消毒培養(yǎng)室。

‌合理使用抗生素‌：添加‌青霉素/鏈霉素‌或‌慶大霉素‌防止細(xì)菌污染，但避免長期使用以防細(xì)胞毒性。對于真菌污染，可考慮添加兩性霉素B。

‌定期檢測支原體‌：使用PCR等方法定期檢測，確保培養(yǎng)物純凈。

基質(zhì)與培養(yǎng)器皿優(yōu)化：

‌包被培養(yǎng)表面‌：使用‌明膠、多聚賴氨酸（PLL）或膠原蛋白‌包被培養(yǎng)瓶/皿，增強細(xì)胞貼壁性。例如，膠原包被對小梁網(wǎng)細(xì)胞貼壁有益。

‌選擇合適培養(yǎng)器皿‌：生長較慢的細(xì)胞（如原代小梁網(wǎng)細(xì)胞）建議使用‌透氣性好的塑料培養(yǎng)瓶‌，利于氣體交換。

細(xì)胞狀態(tài)監(jiān)測與質(zhì)量控制

‌定期觀察形態(tài)‌：使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞是否保持典型的“鋪路石”樣或成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，及時更換老化細(xì)胞。

‌檢測細(xì)胞活力‌：通過臺盼藍染色檢測細(xì)胞存活率（應(yīng)≥90%）。

‌評估代謝活性‌：使用MTT法等評估細(xì)胞代謝活性。