HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞（STR鑒定）

細胞特性：

1） 來源：腎皮質(zhì)/近端小管

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備 角質(zhì)細胞無血清培養(yǎng)基添加對應(yīng)因子按照收到的生長因子對應(yīng)規(guī)格：1mL加0.2%, 5mL 加1%，同時添加1% P/S 來培養(yǎng)細胞?；蛘?nbsp;準備Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) 來培養(yǎng)細胞。

備注:

1. Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培養(yǎng)液包含兩個組份：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶500mL+生長因子1管1mL .

2. 該細胞貼壁較慢，為使細胞貼壁更容易，建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液，并于貼壁24~48小時后再進行后續(xù)操作。

3. 該細胞生長依賴于人表皮生長因子EGF，故而生長不能過密，請在融合度達到80%時進行傳代。

4.使用0.05%胰/酶消化細胞，由于角質(zhì)細胞無血清培養(yǎng)基或者Defined K-SFM為無血清培養(yǎng)液無法終止胰/酶消化，所以消化完成后要通過離心（建議125xg離心5到10分鐘）（或者加入加入3-4ml用RPMI1640或者DMEM等基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的含10%FBS）的培養(yǎng)基來終止消化，1000rpm/5min,去除胰/酶后再加入細胞完培進行傳代培養(yǎng)。

5.Defined K-SFM是一種無血清培養(yǎng)基，添加生長因子后請不要過濾。在無血清培養(yǎng)體系中，HK-2細胞生長緩慢并且需要一些時間才能貼壁，在培養(yǎng)基中看到許多圓形，漂浮和折射細胞是正常情況，不要丟棄松散附著和圓形的漂浮細胞，收集離心后可以重新加入到培養(yǎng)瓶中。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：完培92.5%，7.5%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4）傳代比例：如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是1:2。傳代周期：4-6天，換液頻率：每周 2-3次。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞（STR鑒定）

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